از زمان ابداع روش پروتئين بلاتينگ تاكنون، اين روش به يك ابزار رايج در آزمايشگاه هاي تحقيقاتي تبديل شده است. به طور مرسوم اين روش براي شناسايي پروتئين ها در نمونه هايي شامل مخلوطي پيچيده از مولكول هاي پروتئيني مختلف و يا بررسي بروز پروتئين ها به كار مي رود.

وسترن بلاتينگ، شامل جدا سازي مخلوط پروتئيني بر روي ژل و سپس انتقال آنها به غشاي مناسب مي باشد. در اين روش يك مولكول پروتئيني از طريق ميان كنش آن با آنتي بادي اختصاصي نشاندار شناساي مي گردد.

در آزمايشگاه هاي طبي از وسترن بلاتينگ براي مواردي نظير تأييد تشخيص بيماري هاي عفوني و انگلي، بيماري هاي خود ايمني و آلرژي استفاده مي شود.

كتاب حاضر در قسمت اصول نظري و عملي مشتمل بر سه بخش اصلي تدوين شده است. در قسمت اصول نظري به شرح مفاهيم بنيادي و معرفي عواملي كه در انجام وسترن بلاتينگ نقشي دارند، پرداخته شده است. در بخش دوم جزئيات نحوه انجام و بهينه سازي وسترن بلاتينگ به صورت قدم به قدم ارائه شده است.

در نهايت در بخش سوم به تفصيل مشكلات و شيوه رفع آنها در طي انجام و بهينه سازي اين روش مورد بحث قرار گرفته است. همچنين در پيوست انتهاي كتاب، براي استفاده و ارتقاي كارايي كتاب حاضر، طرز تهيه مواد و محلول هاي مورد استفاده براي انجام وسترن بلاتينگ، شرح اصطلاحات مورد استفاده در طول كتاب و سرانجام فهرست آدرس هاي كمپاني فعال در زمينه ساخت و توزيع مواد و وسايل مورد استفاده در وسترن بلاتينگ ارائه شده است.

در نگارش كتاب تلاش شده است تا شكل ها و جداول به گونه اي طراحي شود كه به فهم و درك ساده مطالب ارائه شده، كمك كند. همچنين در بخش عملي روش هاي ارائه شده مطابق روش هايي است كه به طور معمول در بخش ايمونوبيوشيمي مورد استفاده قرار مي گيرد.

كتاب حاضر در 122 صفحه و به قيمت 20 هزار ريال جهت استفاده در مراكز تحقيقاتي، آموزشي و تشخيصي كشور مفيد مي باشد.

عنوان................................................................................................................. صفحه

پيشگفتار مؤلفين.................................................................................................. 11

اختصارات............................................................................................................. 14

بخش اول: اصول نظري وسترن بلاتينگ................................................................ 15

تاريخچه بلاتينگ (لكه گذاري) پروتئين......................................................................... 16

كاربرد پروتئين بلاتينگ در علوم حياتي........................................................................ 17

بلاتينگ پروتئين و مراحل آن...................................................................................... 19

فصل اول: مرحله انتقال

روش انتقال پروتئين ها از محلول به غشا (دات بلاتينگ)................................................ 22

روش انتقال پروتئين ها از ژل به غشا......................................................................... 23

اصول انتقال مولكول هاي پروتئين به كمك جريان الكتريسيته........................................... 26

انواع انتقال مولكول هاي پروتئيني به كمك جريان الكتريسيته.......................................... 27

فصل دوم: عوامل مؤثر در روند بلاتينگ پروتئين ها

ميزان جدا شدن مولكول هاي پروتئين از ژل................................................................. 32

ميزان اتصال مولكول هاي پروتئين به غشا................................................................... 32

انواع غشاهاي مورداستفاده در پروتئين بلاتينگ........................................................... 32

ماهيت بافر ترانسفر................................................................................................ 36

شدت جريان الكتريكي............................................................................................ 37

فصل سوم: مرحله شناسايي

استانداردهاب پروتئيني........................................................................................... 40

رنگ آميزي عمومي پروتئين هاي متصل به غشا........................................................... 42

سيستم هاي شناسايي ايمونولوژيك........................................................................ 45

محلول هاي اشباع كننده (بلوكه كننده)...................................................................... 47

مجاورت غشا با آنتي بادي ها.................................................................................. 49

مرحله شستشو.................................................................................................... 53

روش هاي شناسايي............................................................................................. 54

بخش دوم: اصول عملي وسترن بلاتينگ............................................................... 65

مقدمه................................................................................................................. 67

مرحله انتقال به كمك جريان الكتريسيته (الكتروترانسفر)................................................ 68

مرحله رنگ آميز عمومي پروتئين ها........................................................................... 71

برش زدن لاين هاي (نوارهاي) حركت پروتئين ها.......................................................... 74

شناسايي ايمونولوژيك پروتئين هاي متصل به غشا...................................................... 75

احياي غشا براي استفاده مجدد در ايمونوبلاتينگ......................................................... 80

بلاتينگ مضاعف..................................................................................................... 82

دات بلاتينگ پروتئين............................................................................................... 84

بخش سوم: عيب يابي و راهنماي عملي رفع معايب در وسترن بلاتينگ................. 87

مرحله انتقال (الكتروترانسفر).................................................................................... 88

مرحله شناسايي................................................................................................... 93

پيوست ها

پيوست 1 – روش تهيه محلول ها و بافرهاي موردنياز در وسترن بلاتينگ ئ دات بلاتينگ....... 101

پيوست 2 – واژه نامه.............................................................................................. 111

پيوست 3 – آدرس الكترونيكي شركت هاي معتبر در زمينه توليد مواد و وسايل مرتبط با وسترن

بلاتينگ................................................................................................................ 119

آدرس شركت هاي داخلي فعال در زمينه توليد و توزيع مواد و وسايل مرتبط با وسترن

بلاتينگ................................................................................................................ 122

مراجع................................................................................................................ 125